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灌流细胞培养原代细胞的传代培养方法浅析

 灌流细胞培养原代细胞是指从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的 细胞,称为原代细胞。原代细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是种将细胞种保存下去的方法。同时也利培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
  一般认为,培养的原代的第1代细胞和传代到第10代以内的细胞统称为原代细抱培养。在人工条件下使其原代细胞生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞疡变、细胞工程等问题的研究。
  那么关于原代细胞的传代培养,一般有以下两种方法,具体操作步骤:
  一、贴壁细胞的消化法传代
  1、吸除或倒掉瓶内旧培养液。
  2、加入1ml左右消化液(胰蛋白鳄或与EDTA混合液)轻轻接动培养瓶,使瓶底细胞都浸入溶液中.
  3、消化2-5分钟后把培养瓶放置在显微镜下进行观察,发现原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时,弃去消化液,加入培养液终止消化。
  4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37℃培养箱中继续培养.第二天观察贴壁生长情况。
  二、悬浮细胞的传代
  1、直接传代
  ①让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后,将上清吸掉1/2-2/3。
  ②用吸管吹打形成细胞悬液后,分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37℃培养箱中培养。
  2、离心法传代
  ①将细胞连同培养液一并转移到离心管内,离心800-1 OOOrpm, 5分钟。
  ②去除上清,加新的培养液到离心管内,用吸管吹打使之形成细胞悬液。
  ③将细胞悬液分别接种到另外两到三个培养瓶中,置37℃培养箱中培养

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