灌流工艺开发ELISA即酶联吸附试验,是一种常用的固相酶免疫测定方法。Engvall 和Perlmann于1971年最先应用该法进行了IgG定量测定,并命名为"enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)"。
ELISA免疫测定的目的:
1.测定体液中的各种蛋白质,包括含量极少的蛋白质如甲胎蛋白等;
2.测定激素,包括小分子量的甾体激素等;
3.测定抗生素和药物;
4.测定病原体抗原,HBsAg、HBeAg等;
5.利用纯化的抗原检测标本中的抗体,例如抗-HBs等;
影响ELISA试验结果的因素:
主要包括检测板、包被缓冲液、捕获抗体、封闭缓冲液、靶抗原、检测抗体、酶偶联物、洗涤液、底物、信号检测的质量和完整性都会干扰正确的 ELISA 测试。一些可能干扰测试的因素如下:
1.微孔板:孔的形状和质量、板的材料、潜在的预激活、均匀或不均匀的涂层;
2.缓冲液:pH、污染;
3.捕获和检测抗体:孵育时间、温度、特异性、滴度、亲和力;
4.封闭缓冲液:交叉反应、浓度、污染;
5.靶抗原:构象、稳定性、表位;
6.酶结合物:类型、浓度、功能、交叉反应;
7.清洗:污染、频率、体积、持续时间、成分;
8.基板:微孔板的质量、材质;
9.检测:检测相关的仪器设备:比如:分光光度计、读板机等相关因素;
10. 误差:人为误差(实验步骤不规范等)。
ELISA免疫测定的目的:
1.测定体液中的各种蛋白质,包括含量极少的蛋白质如甲胎蛋白等;
2.测定激素,包括小分子量的甾体激素等;
3.测定抗生素和药物;
4.测定病原体抗原,HBsAg、HBeAg等;
5.利用纯化的抗原检测标本中的抗体,例如抗-HBs等;
影响ELISA试验结果的因素:
主要包括检测板、包被缓冲液、捕获抗体、封闭缓冲液、靶抗原、检测抗体、酶偶联物、洗涤液、底物、信号检测的质量和完整性都会干扰正确的 ELISA 测试。一些可能干扰测试的因素如下:
1.微孔板:孔的形状和质量、板的材料、潜在的预激活、均匀或不均匀的涂层;
2.缓冲液:pH、污染;
3.捕获和检测抗体:孵育时间、温度、特异性、滴度、亲和力;
4.封闭缓冲液:交叉反应、浓度、污染;
5.靶抗原:构象、稳定性、表位;
6.酶结合物:类型、浓度、功能、交叉反应;
7.清洗:污染、频率、体积、持续时间、成分;
8.基板:微孔板的质量、材质;
9.检测:检测相关的仪器设备:比如:分光光度计、读板机等相关因素;
10. 误差:人为误差(实验步骤不规范等)。
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