注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
　　生物药cdmo测定原理：
　　在酸性环境中，酸性磷酸酶(ACP)催化对硝基苯磷酸二钠水解生成4-硝基苯酚，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm吸光度增加速率，来计算ACP活性。
　　2. 组织、细菌或细胞中ACP活性计算
　　（1）按照蛋白浓度计算
　　活性单位定义：30℃中每毫克蛋白每分钟催化产生1 μmol 4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。
　　ACP活力(μmol/min/mg prot)=(ΔA-0.0179)÷14.6672×V反总÷T÷(V样×Cpr)
　　=0.2273 ×（ΔA-0.0179）÷Cpr
　　（2）按照样本质量计算
　　活性单位定义：30℃中每克组织每分钟催化产生1 μ mol 4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。
　　ACP活力 (μmol/min/g 鲜重)=(ΔA-0.0179)÷14.6672×V反总÷T÷(W×V 样÷V 样总)
　　= 0.2273 ×（ΔA-0.0179）÷W
　　（3）按照细菌或细胞数量计算
　　活性单位定义：30℃中每104个细菌或细胞每分钟催化产生1 μ mol 4-硝基苯酚定义为1个酶活单位。
　　ACP活力 (μmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0179)÷14.6672 ×V反总÷T ÷（细胞数量×V 样÷V 样总）
　　= 0.2273 ×（ΔA-0.0179）÷细胞数量
　　V反总：反应体系总体积（mL），1 mL； W ：样品质量，g； V样：加入反应体系中样本体积（mL），0.01 mL；V样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间（min），30 min；500：细胞或细菌总数，500万。
　　注意事项：
　　ACP不稳定，尤其在37℃和pH大于7的条件下活力丧失快，因此酸性磷酸酶样品一般需当天准备；血清样品中，每毫升血清中加入10mg柠檬酸氢二钠或者5mg硫酸氢钠，使pH降至6.5以下，或5ml血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。
　　2. Tm值的大小还与核酸分子的长度有关，核酸分子越长，Tm值越大；
　　3. 粒子强度越高，熔解温度越高，熔解温度范围越窄。
　　四、DNA的复性
　　加热变性的DNA在缓慢冷却后可以由单链恢复为双链结构，这一过程称为DNA的复性，也称为“退火 (annealing)"。
　　当温度降低至比变性DNA的Tm低25℃时，其复性效果*佳，越远离此温度，复性效果越差。
　　因此，可以利用此特性，在加热使模板DNA变性后，将温度降低至特定温度，从而使所加引物与模板DNA复性结合，进而能够对引物所规定的核酸片段进行特异性的扩增。
　　五、DNA聚合酶
　　为了使模板中特定的核酸片段进行扩增，在模板与引物结合后，需要有DNA聚合酶的参与，但是由于DNA变性和复性过程的温度较高，普通的DNA聚合酶在此过程中会由于温度过高而失活。
　　科学家为了解决该问题，从水生栖热菌 (Thermus Aquaticus) 中分离出了具有热稳定性的DNA聚合酶，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活。